Rumput laut coklat (Sargassum polycystum) adalah salah satu sumber daya yang ada di perairan Indonesia yang tumbuh pada terumbu karang, memiliki banyak senyawa bioaktif, mineral, dan vitamin. Diabetes mellitus adalah salah satu penyakit yang sangat umum diderita oleh masyarakat Indonesia dari kalangan remaja hingga dewasa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidaseoleh ekstrak rumput laut coklat, menentukan nilai IC50, dan mengetahui senyawa bioaktif yang terkandung. Penelitian ini menganalisis total kadar flavonoid, senyawa bioaktif yang terkandung, penghambatan yang terjadi pada enzim α-glukosidase dengan metode maserasi, uji FTIR, uji GCMS, dan uji Uv-Vis. Hasil randemen ekstrak rumput laut 1,293%. Pengukuran bilangan gelombang dengan uji FTIR dihasilkan bilangan gelombang tertinggi 3371,89 cm-1 , identifikasi senyawa bioaktif sangat banyak ditemui dengan uji GC-MS menghasilkan senyawa asam palmitat, pengukuran kadar flavonoid total dilakukan sebanyak dua kali dengan nilai rata-rat 2740 mgQE/g. %inhibisi dengan sampel akarabosa dihasilkan 92,10526% dan %inhibisi dengan sampel ekstrak rumput laut coklat dihasilkan 93,85965%. Kesimpulan penelitian ini adalah dapat mengetahui penghambatan terhadap enzim α-glukosidase, mengetahui nilai IC50, dan mengetahui senyawa bioaktif yang terkandung dalam rumput laut coklat.