Kawasan Hutan Lindung Mata Ie Anoi Itam merupakan kawasan mata air yang airnya mengalir melalui terumbu karang dan termasuk dalam hutan karst yang terdapat di Kota Sabang. Sangat sedikit informasi mengenai tumbuhan paku pada Kawasan tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis-jenis tumbuhan paku, tingkat keanekaragaman serta habitat tumbuhan paku yang terdapat di Kawasan Hutan Lindung Mata Ie Anoi Itam. Penelitian ini dilakukan dengan metode jelajah pada 2 stasiun berdasarkan ketinggian, pada setiap stasiun masing-masing terdapat 1 line transek dengan ukuran 100 x 10 m2. Pengambilan sampel dilakukan pada 2 stasiun, stasiun pertama dengan ketinggian 28,21-49,30 mdpl dan stasiun kedua memiliki ketinggian 68,02-94,61 mdpl. Parameter yang diukur dalam penelitian ini yaitu jenis-jenis dan jumlah tumbuhan paku, pH tanah, kelembaban tanah, kelembaban udara, suhu udara dan ketinggian. Hasil penelitian keanekaragaman tumbuhan paku yang terdapat di Kawasan Hutan Lindung Mata Ie Anoi Itam Kecamatan Suka Jaya Kota Sabang diperoleh 13 jenis tumbuhan paku yang terdiri dari 7 famili 398 individu. Indeks keanekaragaman tumbuhan paku pada seluruh stasiun pengamatan tergolong sedang, yaitu H'= 2,395. Habitat tumbuhan paku yang berada di Kawasan Hutan Lindung Mata Ie Anoi Itam terdiri dari bebatuan karang, pohon dan tanah. Tumbuhan paku yang ditemukan di bebatuan karang berjumlah 4 spesies, tumbuhan paku yang ditemukan di pohon sebanyak 2 spesies dan tumbuhan paku yang ditemukan di tanah sebanyak 9 spesies. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan keanekaragaman jenis tumbuhan paku pada setiap ketinggian dan pertumbuhannya juga sangat dipengaruhi oleh substrat sebagai tempat hidupnya.