Biji Kuwalot merupakan tumbuhan family simaroubaceae yang dikenal dengan nama umum yaitu ‘Buah Makassar’. Biji Kuwalot ini mengandung beberapa senyawa antioksidan seperti alkaloid, flavonoid, lignin, alkaloid glikosida, glikosida quassinoid, dan quassinoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui senyawa-senyawa yang teridentifikasi pada GC-MS dan untuk menguji aktivitas antidiabetes Biji Kuwalot (Brucea javanica L.merr) dengan menggunakan metode penghambatan enzim α-glukosidase. Analisis GC-MS memberi informasi kandungan senyawa yang terdapat dalam ekstrak etanol dari Biji Kuwalot mengandung 27 senyawa kimia, diantaranya adalah 3 senyawa (Dimetil Fulmarate, D-L-Arabinose dan Thymol) yang berperan sebagai ligan antidiabetes, diantara 3 senyawa tersebut terdapat salah satu yang persentasenya paling tinggi yaitu Dimetil Fulmarate. Kemudian ekstrak etanol Biji Kuwalot diuji dengan spektrofotometri massa dan uji aktivitas enzim α-glukosidase. Hasil dari akarbose mempunyai lC50 sebesar 6,231 ppm dan lC50 larutan uji 14,069 ppm. Berdasarkan hasil uji dengan akarbose, larutan uji ekstrak etanol lebih lemah dibandingkan akarbose, tetapi larutan uji ekstrak etanol dapat menghambat aktivitas ezim α-glukosida. Temuan penelitian ini diharapkan dapat memberikan landasan ilmiah yang kuat untuk menetapkan potensi terapeutik Biji Kuwalot dalam pengelolaan diabetes mellitus